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1. 发明公开

KR1020080062374A 재조합 아데노 연관 바이러스 혈청형 ２ 벡터의 대량 생산및 정제 방법 无效
标题翻译：重组腺相关病毒血清型2载体的大量生产和纯化方法
公开(公告)号：KR1020080062374A
公开(公告)日：2008-07-03
申请号：KR1020060138112
申请日：2006-12-29
申请人： 박기랑 , 주식회사 에스이씨
发明人： 박기랑 , 조영화
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/66 , C12N15/09
摘要： A method for mass-producing a recombinant adeno-associated virus sero type 2(rAAV2) vector and a method for purifying the rAAV2 vector are provided to increase production efficiency and infection efficiency of the rAAV2 vector, save production cost, and minimize immuno-reaction caused by contaminated proteins by improving the purification degree, thereby being useful for producing a gene therapeutic agent for clinical test. A method for mass-producing a recombinant adeno-associated virus sero type 2(rAAV2) vector comprises the steps of: (a) transforming a 293T cell(ATCC CRL-11268) using a pAAV vector including a target gene, an AAV rep-cap plasmid DNA including an AAV2 replication(rep) sequence and an AAV2 capside(cap) sequence, and an adenovirus helper plasmid; (b) culturing the transformed 293T cell for 2-3 days; and (c) lysing the cultured cell line to obtain an rAAV2 vector. A method for purifying the rAAV2 vector comprises the steps of: (a) transforming a cell with the pAAV vector including the target gene, the AAV rep-cap plasmid DNA including the AAV2 replication(rep) sequence and the AAV2 capside(cap) sequence, and the adenovirus helper plasmid; (b) culturing the transformed cell; (c) after lysing the cultured cell, subjecting the lysed cell to CsCl density gradient centrifugation to isolate the rAAV2 vector; and (d) subjecting the isolated rAAV2 vector to centrifugal filtration using Centricon. Further, the target gene is one or more selected from VEGFR-1(vascular endothelial growth factor receptor-1), cDNA, VEGFR-2 cDNA, antisense VEGF-A cDNA, antisense VEGF-B cDNA and antisense VEGF-C cDNA.
摘要翻译：提供大规模生产重组腺相关病毒血清型2（rAAV2）载体的方法和纯化rAAV2载体的方法，以提高rAAV2载体的生产效率和感染效率，节省生产成本，并使免疫反应最小化通过提高净化度而被污染的蛋白质引起，从而可用于制备用于临床试验的基因治疗剂。用于大规模生产重组腺相关病毒血清型2（rAAV2）载体的方法包括以下步骤：（a）使用包含目标基因，AAV代表的pAAV载体转化293T细胞（ATCC CRL-11268）包含AAV2复制（rep）序列和AAV2盖帽（cap）序列的载体质粒DNA和腺病毒辅助质粒; （b）培养转化的293T细胞2-3天; 和（c）裂解培养的细胞系以获得rAAV2载体。用于纯化rAAV2载体的方法包括以下步骤：（a）用包含目标基因的pAAV载体，包括AAV2复制（rep）序列的AAV rep-cap质粒DNA和AAV2盖帽（cap）序列转化细胞，和腺病毒辅助质粒; （b）培养转化细胞; （c）在裂解培养的细胞后，将裂解的细胞进行CsCl密度梯度离心以分离rAAV2载体; 和（d）使用Centricon对分离的rAAV2载体进行离心过滤。此外，靶基因是选自VEGFR-1（血管内皮生长因子受体-1），cDNA，VEGFR-2 cDNA，反义VEGF-A cDNA，反义VEGF-B cDNA和反义VEGF-C cDNA中的一种或多种。

2. 发明授权

KR100737286B1 ＶＥＧＦＲ 트렁케이티드 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합아데노-연관 바이러스 및 이를 함유하는 암-특이적 유전자치료제 失效
标题翻译：含有VEGFR截短的cDNA的重组腺相关病毒和包含其的癌基因治疗剂
公开(公告)号：KR100737286B1
公开(公告)日：2007-07-13
申请号：KR1020050080822
申请日：2005-08-31
申请人： 박기랑 , 김원재 , 충북보건과학대학교 산학협력단 , 정경환 , 문성권 , 조영화
发明人： 박기랑 , 김원재 , 조영화
IPC分类号： C12N15/861 , A61K39/00
摘要： 본 발명은 VEGF 수용체단백질(VEGFR)의 truncated cDNA와 아데노-연관 바이러스(AAV) 시스템을 이용한 유전자 치료제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, VEGFR-1의 truncated cDNA를 함유하는 rAAV 벡터, VEGFR-2의 truncated cDNA를 함유하는 rAAV 벡터 및 상기 벡터를 함유하는 암-특이적 유전자 치료제에 관한 것이다.
본 발명에 따른 유전자 치료제는 종양의 증식 및 전이에 필수적인 혈관신생에 관여하는 VEGF의 발현 및 기능을 억제하여, 종양의 성장을 감소시킴으로서 암을 유전자 차원에서 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다.
rAAV, 유전자 치료제, VEGF, VEGF 수용체, 아데노-연관 바이러스

3. 发明授权

KR100772424B1 ⅤＥＧＦ－Ａ，ⅤＥＧＦ－Ｂ，및 ⅤＥＧＦ－Ｃ의 안티센스 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합 아데노-연관 바이러스 및 ⅤＥＧＦＲ 트렁케이티드 솔루블 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합 아데노-연관 바이러스를 포함하는 암의 유전자 치료제 有权
标题翻译：包含含有VEGF-A，VEGF-B和VEGF-C的反义cDNA的重组腺相关病毒和含有VEGFR截短的可溶性cDNA的重组腺相关病毒的基因治疗剂
公开(公告)号：KR100772424B1
公开(公告)日：2007-11-01
申请号：KR1020050071557
申请日：2005-08-05
申请人： 박기랑 , 충북보건과학대학교 산학협력단
发明人： 박기랑 , 김원재 , 조영화
IPC分类号： A61K48/00
摘要： 본 발명은 VEGF-A, VEGF-B, 및 VEGF-C의 안티센스 cDNA를 함유하는 rAAV 벡터와 VEGF 수용체단백질(VEGFR)의 가용성 불완전(truncated soluble) cDNA를 함유하는 rAAV 벡터를 포함하는 암의 유전자 치료제에 관한 것이다.
본 발명에 따른 유전자 치료제는 종양의 증식 및 전이에 필수적인 혈관신생에 관여하는 VEGF의 발현 및 기능을 억제하여, 종양의 성장을 감소시킴으로서 암을 유전자 차원에서 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다.
rAAV, 유전자 치료제, VEGF, VEGF 수용체, 아데노-연관 바이러스

4. 发明公开

KR1020070013802A ＶＥＧＦ－Ａ, ＶＥＧＦ－Ｂ 및 ＶＥＧＦ－Ｃ의 안티센스ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합 아데노-연관바이러스（ｒＡＡＶ） 및 이를 함유하는 대장암, 방광암및/또는 폐암 특이적 유전자 치료제 失效
标题翻译：包含VEGF-A，VEGF-B和VEGF-C以及特定于大肠癌，乳腺癌和/或包含其中的肺癌的基因治疗药物的抗体亚型相关病毒的重组腺病毒病毒
公开(公告)号：KR1020070013802A
公开(公告)日：2007-01-31
申请号：KR1020050068427
申请日：2005-07-27
申请人： 박기랑 , 김원재 , 충북보건과학대학교 산학협력단 , 안미영 , 황석연 , 조영화 , 이희란
发明人： 박기랑 , 안미영 , 황석연 , 조영화 , 이희란 , 김원재
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/34
摘要： A recombinant adeno-associated virus comprising antisense cDNAs of VEGF-A(vascular endothelial growth factor-A), VEGF-B and VEGF-C and a gene therapeutic agent specific to large intestine cancer, bladder cancer and/or lung cancer comprising the same virus are provided to reduce proliferation of tumor cells by inhibiting expression of VEGF associated with angiogenesis which is necessary for proliferation and transition of tumor cells. The recombinant adeno-associated virus(rAAV) vector comprises an antisense cDNA of VEGF-A of SEQ ID NO:1, an antisense cDNA of VEGF-B of SEQ ID NO:4 and an antisense cDNA of VEGF-C of SEQ ID NO:7, wherein the rAAV vector is prepared by (a) transfecting an animal cell line with pAAV vector containing the antisense cDNA of VEGF-A of SEQ ID NO:1, the antisense cDNA of VEGF-B of SEQ ID NO:4 and the antisense cDNA of VEGF-C of SEQ ID NO:7, an AAV rep-cap plasmid DNA and an adenovirus helper plasmid, (b) culturing the transfected animal cell line, and (c) destroying the cultured animal cell line, and isolating and purifying the rAAV particle. The gene therapeutic agent specific to large intestine cancer, bladder cancer and/or lung cancer comprises the recombinant adeno-associated virus(rAAV) vector.
摘要翻译：包含VEGF-A（血管内皮生长因子-A），VEGF-B和VEGF-C的反义cDNA以及对大肠癌，膀胱癌和/或肺癌特异性的基因治疗剂的重组腺相关病毒提供病毒以通过抑制肿瘤细胞增殖和转化所必需的血管生成相关VEGF的表达来减少肿瘤细胞的增殖。重组腺相关病毒（rAAV）载体包含SEQ ID NO：1的VEGF-A的反义cDNA，SEQ ID NO：4的VEGF-B的反义cDNA和SEQ ID NO：4的VEGF-C的反义cDNA 7，其中rAAV载体通过以下步骤制备：（a）用含有SEQ ID NO：1的VEGF-A的反义cDNA，SEQ ID NO：4的VEGF-B的反义cDNA的pAAV载体转染动物细胞系，以及 SEQ ID NO：7的VEGF-C的反义cDNA，AAV rep-cap质粒DNA和腺病毒辅助质粒，（b）培养转染的动物细胞系，和（c）破坏培养的动物细胞系，并纯化rAAV颗粒。特异于大肠癌，膀胱癌和/或肺癌的基因治疗剂包括重组腺相关病毒（rAAV）载体。

5. 发明授权

KR100697321B1 ＶＥＧＦ－Ａ, ＶＥＧＦ－Ｂ 및 ＶＥＧＦ－Ｃ의 안티센스ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합 아데노-연관바이러스（ｒＡＡＶ） 및 이를 함유하는 대장암, 방광암및/또는 폐암 특이적 유전자 치료제 失效
标题翻译：包含VEGF-A，VEGF-B和VEGF-C的反义cDNA的重组腺相关病毒以及特定于大肠癌，膀胱癌和/或其中的肺癌的基因治疗剂
公开(公告)号：KR100697321B1
公开(公告)日：2007-03-20
申请号：KR1020050068427
申请日：2005-07-27
申请人： 박기랑 , 김원재 , 충북보건과학대학교 산학협력단 , 안미영 , 황석연 , 조영화 , 이희란
发明人： 박기랑 , 안미영 , 황석연 , 조영화 , 이희란 , 김원재
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/34
摘要： 본 발명은 VEGF-A, VEGF-B 및 VEGF-C의 안티센스 cDNA와 아데노-연관 바이러스(AAV) 시스템을 이용한 유전자 치료제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, VEGF-A 안티센스 cDNA, VEGF-B 안티센스 cDNA 및 VEGF-C 안티센스 cDNA를 함유하는 rAAV 벡터 및 상기 rAAV 벡터를 포함하는 대장암, 방광암 및/또는 폐암-특이적 유전자 치료제에 관한 것이다.
본 발명에 따른 유전자 치료제는 종양의 증식 및 전이에 필수적인 혈관신생에 관여하는 VEGF의 발현을 효율적으로 억제하여, 종양의 성장을 감소시킴으로서 암을 유전자 차원에서 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다.
VEGF 안티센스, 유전자치료제, rAAV

6. 发明公开

KR1020070025068A ＶＥＧＦＲ 트렁케이티드 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합아데노-연관 바이러스 및 이를 함유하는 암-특이적 유전자치료제 失效
标题翻译：包含VEGFR截断的CDNA的重组腺病毒病毒和包含其的癌基因治疗剂
公开(公告)号：KR1020070025068A
公开(公告)日：2007-03-08
申请号：KR1020050080822
申请日：2005-08-31
申请人： 박기랑 , 김원재 , 충북보건과학대학교 산학협력단 , 정경환 , 문성권 , 조영화
发明人： 박기랑 , 김원재 , 조영화
IPC分类号： C12N15/861 , A61K39/00
摘要： A gene therapeutic agent comprising a recombinant adeno-associated virus(rAAV) vector containing a truncated cDNA of VEGFR-1 or an rAAV vector containing a truncated cDNA of VEGFR-2 is provided to inhibit the expression and function of VEGF involving with angiogenesis necessary to proliferation and transition of tumor and decrease the growth of the tumor, thereby being effectively used for genetically treating cancer. The rAAV vector comprises a truncated cDNA of VEGFR-1, and is prepared by the method comprising the steps of: (a) transfecting a pAAV vector containing a truncated cDNA of VEGFR-1, AAV rep-cap plasmid and adenovirus helper plasmid into an animal cell line; (b) culturing the transfected animal cell line; and (c) after crushing the cultured cell line, isolating recombinant rAAV particles therefrom and purifying them. The gene therapeutic agent specific to cancer comprises the rAAV vector.
摘要翻译：提供了包含含有VEGFR-1的截短的cDNA的重组腺相关病毒（rAAV）载体或含有VEGFR-2的截短cDNA的rAAV载体的基因治疗剂，以抑制涉及血管生成的VEGF的表达和功能，肿瘤的增殖和转移，并减少肿瘤的生长，从而有效地用于基因治疗癌症。 rAAV载体包含VEGFR-1的截短的cDNA，并通过包括以下步骤的方法制备：（a）将含有VEGFR-1，AAV rep-cap质粒和腺病毒辅助质粒的截短cDNA的pAAV载体转染到动物细胞系; （b）培养转染的动物细胞系; 和（c）在破碎培养的细胞系后，从其中分离重组rAAV颗粒并进行纯化。癌症特异性基因治疗剂包括rAAV载体。

7. 发明公开

KR1020070016688A ⅤＥＧＦ－Ａ，ⅤＥＧＦ－Ｂ，및 ⅤＥＧＦ－Ｃ의 안티센스 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합 아데노-연관 바이러스 및 ⅤＥＧＦＲ 트렁케이티드 솔루블 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합 아데노-연관 바이러스를 포함하는 암의 유전자 치료제 有权
标题翻译：包含含有VEGF-A，VEGF-B和VEGF-C的反义cDNA的重组腺相关病毒和含有VEGFR截短的可溶性cDNA的重组腺相关病毒的基因治疗剂
公开(公告)号：KR1020070016688A
公开(公告)日：2007-02-08
申请号：KR1020050071557
申请日：2005-08-05
申请人： 박기랑 , 충북보건과학대학교 산학협력단
发明人： 박기랑 , 김원재 , 조영화
IPC分类号： A61K48/00
CPC分类号： A61K48/00 , C12N15/66 , Y10S424/801
摘要： 본 발명은 VEGF-A, VEGF-B, 및 VEGF-C의 안티센스 cDNA를 함유하는 rAAV 벡터와 VEGF 수용체단백질(VEGFR)의 truncated soluble cDNA를 함유하는 rAAV 벡터를 포함하는 암의 유전자 치료제에 관한 것이다.
본 발명에 따른 유전자 치료제는 종양의 증식 및 전이에 필수적인 혈관신생에 관여하는 VEGF의 발현 및 기능을 억제하여, 종양의 성장을 감소시킴으로서 암을 유전자 차원에서 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다.
rAAV, 유전자 치료제, VEGF, VEGF 수용체, 아데노-연관 바이러스

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