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    • 21. 发明公开
    • YlMpo1 과발현을 이용한 만노스인산화 증대 방법
    • 通过YLMPO1过表达增加人造磷酸化的方法
    • KR1020160035484A
    • 2016-03-31
    • KR1020140127144
    • 2014-09-23
    • 한국생명공학연구원
    • 오두병권오석김영훈
    • C12N15/81C12R1/865C12P21/02
    • C12P21/02C12R1/865C12N15/81Y10S435/942
    • 본발명은 YlMpo1 과발현을이용한만노스인산화증대방법에관한것으로, 더욱자세하게는효모특이적인당사슬생합성경로가제거된재조합효모에서 YlMpo1 단백질을과발현하여바이-만노스인산화된(bi-mannosylphosphorylated) 당사슬이부가된단백질을제조하는방법에관한것이다. 본발명의방법으로제조된바이-만노스인산화된(bi-mannosylphosphorylated) 당사슬은효소또는화학적인방법으로손쉽게두 개의만노스-6-인산이부가된바이-인산화된(bi-phosphorylated) 당사슬로변환된후, 만노시다제(mannosidase) 처리에의한트리밍(trimming) 과정을거쳐서만노스-6-인산수용체에높은결합친화력을가진라이소좀타겟팅능력이우월한구조의당사슬(P-ManGlcNAc)로변환할수 있다. 따라서본 발명은효모특이적인당사슬생합성경로가제거된효모에 YlMpo1을과발현시켜서높은함량의바이-만노스인산화된당사슬이부가된당단백질을생산함으로써라이소좀타겟팅능력이우월한당단백질을제공할수 있다.
    • 本发明涉及使用YlMpo1的过度表达增加甘露糖基磷酸化的方法,更具体地说,涉及通过在没有酵母特异性糖链生物合成途径的重组酵母中过表达YlMpo1蛋白来生产双甘露糖基磷酸化糖链蛋白的方法 。 通过本发明方法生产的双甘露糖基磷酸化糖链可以通过酶或化学方法容易地转化成两种加入的甘露糖-6-磷酸二糖的糖链,然后转化成糖链(P_2-Man_6-GlcNAc_2 ),其具有通过用甘露糖苷酶处理修剪来提供对甘露糖-6-磷酸受体的高键亲和力和优异的溶酶体靶向能力的结构。 因此,本发明通过在没有酵母特异性糖链生物合成途径的酵母中过表达YlMpo1而产生高含量的双甘露糖基磷酸化糖链糖蛋白,从而提供具有优异溶酶体靶向能力的糖蛋白。
    • 24. 发明授权
    • 외래 유전자 강제 발현 벡터
    • 外来基因强制表达载体
    • KR101349070B1
    • 2014-01-08
    • KR1020120033009
    • 2012-03-30
    • 한국생명공학연구원
    • 권오석김상윤오두병송재준
    • C12N15/67C12N15/70C40B40/08C12N1/21
    • 본 발명은 외래 유전자 강제 발현 벡터에 관한 것으로, 구체적으로, T7 프로모터, 락토오즈 오퍼레이터 및 유전자 3-프레임 동시번역(Three-Frame Simultaneous Translation, TFST) 컨스트럭트[3개의 리보솜 결합 부위(RBS) 및 각기 다른 프레임으로 개시되는 3개의 개시 코돈(ATG) 포함 단편]가 순차적으로 연결된 유전자 강제 발현 카세트를 제작하고, 상기 유전자 강제발현 카세트 1개 또는 2개가 포함된 유전자 강제 발현 카세트를 벡터에 도입하여, 클로닝되는 DNA 단편이 한 개의 전사단위(mRNA)로 전사되고 이로부터 3개 또는 6개의 프레임의 폴리펩티드가 동시에 번역될 수 있는 강제발현 벡터를 제작하고, 상기 벡터에 3개 또는 6개의 프레임으로 녹색 형광 단백질 유전자를 클로닝한 후, 얻어진 각각의 재조합 발현 벡터가 형질전환 균주에서 녹색 형광 단백질이 모두 높� �� 수준으로 발현됨을 확인하였으므로, 본 발명의 신규 발현 벡터는 메타게놈, 게놈, 혹은 cDNA 라이브러리 제작에 이용될 수 있을 뿐 아니라, 메타게놈 라이브러리, 게놈 라이브러리 또는 cDNA 라이브러리를 제작하여 활성형 단백질을 발현하는 방법, 이들 라이브러리로부터 유용 유전자를 스크리닝하거나, 또는 시험관내 전사/번역 시스템을 이용한 유전자 발굴에 유용하게 이용될 수 있다.
    • 30. 发明公开
    • YlMpo1 단백질을 이용한 만노스인산화 반응
    • 使用YlMpo1蛋白进行肌苷磷酰化反应
    • KR1020150042936A
    • 2015-04-22
    • KR1020130121746
    • 2013-10-14
    • 한국생명공학연구원
    • 오두병강지연길진영권오석
    • C12N15/70
    • C12N15/70C12N2500/10C12N2500/60
    • 본발명은 YlMpo1 단백질을이용한만노스인산화반응에관한것으로, 더욱자세하게는 YlMpo1 생산능을가지는재조합미생물및 YlMpo1을이용하여당사슬에만노스-6-인산을부가시키는방법, 상기방법을이용한만노스-6-인산이부가된당사슬이부착된당단백질또는유용화합물을제조하는방법에관한것이다. 본발명의당사슬에만노스-6-인산을부가시키는방법은생체외()에서효소치료제로사용되는당단백질에효과적으로만노스인산을부가시킬수 있으므로, 동물세포또는당사슬생합성경로가재설계된효모에서만노스-6-인산당사슬이부착된효소치료제를직접생산하는것보다다양한효소치료제제조에응용될수 있으며, 당단백질뿐만아니라, 만노스-6-인산당사슬을내포탈출을위한펩타이드, 지질또는나노물질과결합시켜라이소좀이아닌세포질또는핵 내로유용물질을전달하는데활용할수 있다.
    • 本发明涉及使用YlMpo1蛋白的甘露糖磷酸化,更具体地,涉及使用具有产生YlMpo1和YlMpo1的能力的重组微生物将甘露糖-6-磷酸加入到糖链中的方法以及糖蛋白或有用化合物的制备方法 通过使用其中将甘露糖-6-磷酸加入糖链的方法能够有效地将甘露糖磷酸盐添加到用作体外人体的酶处理剂的糖蛋白中的方法,其具有附着的甘露糖-6-磷酸的糖链,并且 因此用于与直接制造具有附着的甘露糖-6-磷酸糖链的酵母处理剂相比,重新设计动物细胞或糖链的生物合成途径的酵母中的各种酶处理剂,由此用于递送 通过结合糖蛋白,肽来逃避人类,除溶酶体外,细胞质或细胞核的有用物质 来自内部的6-phophate糖链,脂质或纳米材料。