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    • 1. 发明专利
    • 3段階方式矩形波多重パルスを利用した藻類細胞への遺伝子導入法
    • 使用三阶段方法将基因转移到海藻细胞中的技术方波波多重脉冲
    • JP2015008708A
    • 2015-01-19
    • JP2013138581
    • 2013-07-02
    • 国立大学法人京都大学Kyoto Univネッパジーン株式会社Nepa Gene Co Ltd
    • FUKUZAWA HIDEYAYAMANO TAKASHIIFUKU KENTAROHAYAKAWA YASUHIKO
    • C12N15/09A01H1/00A01H13/00C12N1/13
    • C12N15/8206A61N1/0412
    • 【課題】細胞壁を有した状態のままの真核藻類細胞に直接施用可能な技術であって、藻類の種類に限定されることなく高効率で再現性良く遺伝子導入及び形質転換を行うことができる技術を提供することを課題とする。【解決手段】細胞壁を有した状態の緑藻類又は珪藻類の細胞と核酸分子を含有する溶液に対して、高電圧で短時間の矩形波電気パルス(第1電気パルス)の総電力量を所定範囲条件になるようにして与え、次いで低電圧で長時間の矩形波電気パルス(第2電気パルス)を2回以上与え、次いで、前記第2電気パルスとは逆の極性の低電圧で長時間の矩形波電気パルス(第3電気パルス)を2回以上与えて、3段階方式矩形波多重パルスによる電気穿孔(エレクトロポレーション)を行うことことを特徴とする、真核藻類の細胞に外来遺伝子を導入する方法、;及び、前記方法により真核藻類の細胞を形質転換する方法、;を提供する。【選択図】図1
    • 要解决的问题:提供可以直接应用于具有细胞壁的条件的真核海藻细胞的技术,并且可以以高效率和良好的重复性进行转染和转化,而​​不限于一种海藻。 解决方案:提供一种将外源基因引入真核海藻细胞的方法,其包括在短时间内(第一电脉冲)施加具有高电压的方波电脉冲的总电能以成为给定范围的条件 在细胞壁状态下含有绿藻或硅藻细胞和核酸分子的溶液,然后在长时间(第二电脉冲)中施加两次或更多次的具有低电压的方波电脉冲,然后施加方波 电脉冲长时间处于低电压(第三电脉冲),与第二电脉冲相反极性两次以上。 因此,电穿孔(电穿孔)通过三级方法方波复用脉冲进行。 并提供了通过该方法转化真核海藻细胞的方法。