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71. 发明公开

CN103525877A 一种微生物发酵选择性生产3-羟基-2-丁酮和2,3-丁二醇的方法有权
公开(公告)号：CN103525877A
公开(公告)日：2014-01-22
申请号：CN201310342414.8
申请日：2013-08-08
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 杨套伟 , 张显 , 徐美娟
IPC分类号： C12P7/26 , C12P7/18 , C12R1/07
摘要：本发明公开了一种利用一株环境安全菌株Bacillus amyloliquefaciens CCTCC NO:M2012349，通过改变培养基中玉米浆含量及搅拌转速和通气量，就可以选择性生产3-羟基-2-丁酮或2，3-丁二醇的方法，属于生物工程中发酵技术领域。该方法具体的说，主要合成3-羟基-2-丁酮时，可将发酵培养基中的玉米浆浓度降低至5g/L及以下，发酵过程中保持较高的溶氧水平(空气流量为240m3/h·m3培养基，搅拌转速为450r/min)；主要合成2，3-丁二醇时，可将发酵培养基中的玉米浆浓度增加至40g/L及以上，发酵过程中保持较低的溶氧水平(空气流量为120m3/h·m3培养基，搅拌转速为350r/min)。

72. 发明公开

CN103266161A 重组枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis产ADD的发酵策略有权
公开(公告)号：CN103266161A
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201310196282.2
申请日：2013-05-24
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 许正宏 , 张温清 , 邵明龙 , 徐美娟 , 张显 , 李会
IPC分类号： C12P33/02 , C12R1/125
摘要：重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis产ADD的高产发酵策略。通过单因子实验和正交实验，优化了重组菌Bacillus subtilis168/pMA5-ksdD的发酵培养基组分、培养条件及全细胞转化工艺。确定最优培养基中麦芽糖、大豆蛋白胨∶酵母膏(2∶1)、氯化铵、氯化钾、玉米浆、助溶剂甲基-β-环糊精和底物AD的浓度及pH；确定最佳接种量及培养条件。优化后ADD产量达1.80g/L，较优化前的0.65g/L大幅度提高177％。本发明通过对该重组菌发酵策略的研究，使其全细胞转化AD产ADD的能力获得了较大幅度的提高，为工业微生物一步发酵法高产ADD提供了一种可行的发酵策略。

73. 发明公开

CN101864381A 一株以葡萄糖为底物发酵产3-羟基-2-丁酮微生物菌株的选育无效
公开(公告)号：CN101864381A
公开(公告)日：2010-10-20
申请号：CN201010166987.6
申请日：2010-05-10
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 张显 , 林清
IPC分类号： C12N1/20 , C12P7/26 , C12R1/125
摘要：一株以葡萄糖为底物发酵产3-羟基-2-丁酮微生物菌株的选育，属于生物工程中发酵技术领域。本发明筛选的菌株，分类命名为枯草芽孢杆菌(Baclliussubtilis)JNA，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M209309。从自然界的土壤中筛选到能够以葡萄糖为底物发酵产3-羟基-2-丁酮的菌株，并对其进行了形态学与遗传学方面的鉴定，将该菌命名为Bacllius subtilisJNA。对发酵产物进行了定性鉴定，并用气相色谱法(GC)检测到发酵液中3-羟基-2-丁酮含量约50g/L，为微生物发酵法生产3-羟基-2-丁酮的工业化提供了有益的指导。

74. 发明公开

CN101851598A 一株环境安全的以葡萄糖为底物发酵产2,3-丁二醇枯草芽孢杆菌的选育无效
公开(公告)号：CN101851598A
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN201010167019.7
申请日：2010-05-10
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 林清 , 张显 , 杨套伟 , 张术聪
IPC分类号： C12N1/20 , C12R1/125
摘要： 2，3-BDO是一种重要的化工原料和医药前体，例如它可以脱水形成1，3-丁二烯，可用于合成橡胶、聚酯和聚亚胺酯；酯化形式的2，3-BDO是合成聚亚胺的前体，可应用于药物、化妆品、洗液等。此外2，3-BDO还可作为风味物质添加到白酒和奶油中。2，3-BDO可以通过化学合成法和微生物生产法两种，由于2，3-丁二醇结构特殊，化学法生产2，3-丁二醇主要是以石油裂解时产生的四碳类碳氢化合物在高温高压下水解得到，成本高、过程繁琐、不易操作，所以一直很难实现大规模的工业化生产。随着石油价格的日益攀升，用微生物发酵法生产2，3-丁二醇并对其衍生物进行开发研究逐渐引起了人们的关注。发酵法生产2，3-丁二醇有许多优点：首先在成本上具有优势，化学法生产成本比较高；其次，发酵法具有对环境友好的特征，2，3-丁二醇作为有机合成中间体取代了许多的化合物和其它石化产品的市场，前景广阔，社会、环境效益显著，非常有利于该产品的广泛应用；第三由于发酵法生产2，3-丁二醇是以可再生资源为原料的，因此本身摆脱了对石化原料的依赖，具有很好的应用前景。目前，2，3-丁二醇的工业化主要是发酵法，有关研究国外进行的较早，取得的成绩比较显著，国内研究还处于初级阶段，目前国内外发酵法产2，3-丁二醇的研究常用的菌种大都是克雷伯氏菌，而克雷伯氏菌具有潜在的致病性，限制了其工业化的应用。本发明筛选到以葡萄糖为底物高产2，3-丁二醇的微生物菌株，对该菌进行了鉴定，确定其为枯草芽孢杆菌，是环境安全菌株具有较大的工业应用前景，对其发酵条件进行了初步研究，在5L发酵罐上的产量可以达到61.7g/L，为微生物发酵法产2，3-丁二醇的工业化提供了基础。

75. 发明公开

CN117645967A 一种适用于高密度发酵产酶的枯草芽孢杆菌底盘细胞审中-实审
公开(公告)号：CN117645967A
公开(公告)日：2024-03-05
申请号：CN202311607445.1
申请日：2023-11-28
申请人：江南大学
发明人：张显 , 饶志明 , 任可心 , 张恒维 , 王强 , 徐美娟
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/31 , C12N15/55 , C12N15/75 , C12P13/14 , C12P21/00 , C12R1/125
摘要：本发明公开了一种适用于高密度发酵产酶的枯草芽孢杆菌底盘细胞，属于基因工程和酶工程领域。本发明枯草芽孢杆菌168的基础上，通过敲除基因lytC、sigD、mraZ、sigE获得4株高鲁棒性且抵抗发酵后期自溶的底盘细胞BS1～BS4，以及一株组合敲除菌BS5作为底盘细胞。并构建表达载体pMA5‑glsA在构建的底盘细胞中表达L‑谷氨酰胺酶，其中BS5的5‑L发酵罐酶活为B.subtilis 168的1.98倍，且在细胞生物量增加的基础上单位细胞酶活也有增加。本发明中的底盘菌株比工业模式菌株更适用于工业生产，具有非常巨大的应用前景和产业价值。

76. 发明公开

CN117467682A 一种基于N端编码序列增强L-色氨酸合成的方法审中-实审
公开(公告)号：CN117467682A
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202311398501.5
申请日：2023-10-25
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 唐蜜 , 潘学玮 , 杨田金 , 孙启盛 , 徐美娟 , 杨套伟 , 张显
IPC分类号： C12N15/60 , C12N15/62 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12P13/22 , C12R1/19
摘要：本发明公开了一种基于N端编码序列增强L‑色氨酸合成的方法，属于基因工程技术领域。本发明在L‑色氨酸合成关键限速酶邻氨基苯甲酸合酶TrpE的N端编码序列前随机添加10个氨基酸的核苷酸序列，并与绿色荧光蛋白进行融合，构建TrpE‑NCS随机突变文库，最终筛选得到表达强度最高的N端编码序列序列比对照菌株约高出6.2倍。最后，将筛选得到的最优N端编码序列插入到基因trpE的N端，明显增强了ANTA合酶的表达，构建得到的工程菌株TRP08的L‑色氨酸产量在5L发酵罐中可达16.28g/L，约比对照菌株提高18.06％。综上，N端编码序列可作为合成生物学元件用于代谢途径的基因表达调控。

77. 发明授权

CN114990045B 一种重组大肠杆菌及其构建方法与合成1,5-戊二胺的方法有权
公开(公告)号：CN114990045B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202210768627.6
申请日：2022-06-30
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 乔郅钠 , 刘祖怡 , 徐美娟 , 杨套伟 , 张显
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/31 , C12N9/88 , C12N9/12 , C07K14/245 , C12P13/00 , C12R1/19
摘要：本发明提供了一种重组大肠杆菌及其构建方法与合成1,5‑戊二胺的方法，属于基因工程技术领域，该重组大肠杆菌含有催化L‑赖氨酸生成1,5‑戊二胺的赖氨酸脱羧酶最优突变体CadAP530L/M569V、促进底物/产物进/出细胞的赖氨酸/尸胺反向转运蛋白CadB以及提供辅因子PLP自供应吡哆醛激酶I和II，将该重组大肠杆菌作为催化剂，得到的高产量的1,5‑戊二胺，摩尔转化率高达98.67％。本发明提供的合成1,5‑戊二胺的方法，该方法以重组大肠杆菌作为催化剂，不需要额外添加辅因子PLP，不使用缓冲液(无需调节pH)，无需使用盐酸进行中和，合成转化1,5‑戊二胺的时间短，生产成本低，为1,5‑戊二胺的工业化生产提供了一种高效且经济的方法。

78. 发明公开

CN116478896A 一种多酶级联转化富马酸生产D-泛酸的方法审中-实审
公开(公告)号：CN116478896A
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202310387848.3
申请日：2023-04-12
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 许媛怡 , 徐美娟 , 杨套伟 , 张显
IPC分类号： C12N1/21 , C12N15/52 , C12N15/54 , C12N15/60 , C12N15/70 , C12P13/02 , C12R1/19
摘要：本发明公开了一种多酶级联转化富马酸生产D‑泛酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过双质粒表达、表达质粒的启动子和翻译起始区改进和基因复制策略实现各酶的平衡表达，减少了中间产物的积累。更进一步地，在将中间产物转化为D‑泛酸的过程中利用ATP再生系统增强细胞内ATP供应，实现了ATP的免添加，降低反应成本，提高整体转化效率。并从反应的催化剂浓度、pH、温度和补料方式对催化体系进行优化，可使得D‑泛酸产量达到128.6g/L，转化率达到97.3％。从而大大降低了的底物成本和环境污染等问题，为D‑泛酸的工业化生产和绿色生产提供了新思路。

79. 发明授权

CN112725296B 一种黄体酮-17α-羟化酶及其应用有权
公开(公告)号：CN112725296B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202110122382.5
申请日：2021-01-28
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 刘超 , 陈可心 , 王烨彤 , 邵明龙 , 杨套伟 , 徐美娟 , 张显
IPC分类号： C12N9/02 , C12N15/53 , C12N1/19 , C12P33/06 , C12R1/84 , C12R1/865
摘要：本发明公开了一种黄体酮‑17α‑羟化酶及其应用，属于生物技术领域。本发明公开了一种新型的黄体酮‑17α‑羟化酶(MA_CYP450 17a2)，所述黄体酮‑17α‑羟化酶具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。本发明还公开了包含该酶或其编码基因的表达载体、宿主细胞及其在合成17α‑羟基黄体酮中的应用。本发明首次在毕赤酵母细胞体系内异源表达了黄体酮‑17α‑羟化酶，且具有以黄体酮为底物生产17α‑羟基黄体酮的能力，在宿主细胞未经优化的条件下7d反应后生成16.5mg/L的17α‑羟基黄体酮，这为工业化生产17α‑羟基黄体酮奠定了坚实的基础。

80. 发明授权

CN114634885B 一株高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌及其应用有权
公开(公告)号：CN114634885B
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202210088190.1
申请日：2022-01-25
申请人：江南大学
发明人：饶志明 , 韩瑾 , 徐美娟 , 杨套伟 , 张显
IPC分类号： C12N1/20 , C12N15/01 , C12N13/00 , C12P13/00 , A61K35/747 , A61P25/20 , A23L33/135 , C12R1/25
摘要：本发明涉及一株高产γ‑氨基丁酸的植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)HG‑06，于2022年01月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCCNO：M2022109。本发明得到的植物乳杆菌γ‑氨基丁酸产量更高，5L发酵罐转化实验的最终产量为204.37g/L，底物摩尔转化率为97.22％，比出发菌株产量提高了56.83％，为产业化的提高提供了坚实的理论基础和数据参考。

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