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    • 1. 发明授权
    • 단백질의 가용성2가 및 다가 헤테로 이량체 유사체
    • 可溶性二价金属盐
    • KR100544449B1
    • 2006-10-31
    • KR1019980707687
    • 1997-03-28
    • 더 존스 홉킨스 유니버시티
    • 쉬넥조나단피오헤린신
    • C12N15/62C07K19/00C12N5/10
    • 본 발명은 면역 조절과 관련된 단백질의 가용성 2가 헤테로이량체 유사체 및 다가 헤테로이량체 유사체를 포함하는 조성물과, 이를 제조하는 방법 및 사용하는 방법에 관한 것이다.
      면역 반응시 특이성은 부분적으로 동종 리간드, 펩티드/MHC 분자와 T 세포 수용체의 선택적인 상호작용으로 조절된다. 이 상호작용의 차이로 인하여 가용성 형태의 이들 분자는 면역 반응을 선택적으로 조절하는 데 사용할 수 있다. 이들 단백질의 가용성 유사체를 개발하려는 시도는 제한되어 왔는데, 이는 이들 분자의 리간드에 대한 화합력이 본질적으로 작기 때문이다. 생물학적으로 적절한 농도로 동종에 대한 가용성 유사체의 화합력을 증가시키기 위해서, 2가 펩티드/MHC 복합체 또는 T 세포 수용체(초이량체)를 작제하였다. 재조합 DNA 기법을 이용하여, MHC 클래스 II/펩티드 또는 TCR 헤테로이량체를 암호하는 DNA를 쥐 Ig 중쇄 및 경쇄를 암호하는 DNA에 결찰시켰다. 이어서, 이 작제물을 바큘로바이러스 발현계에서 발현시켰다. 분자의 MHC 또는 TCR 부분의 Ig 및 다형성 결정자에 특이적인 효소결합 면역흡착법(ELISA)으로 감염된 세포가 약 1㎍/㎖의 가용성이고 구조적으로 완전한 키메라 초이량체를 분비한다는 것을 알 수 있다. 정제 단백질의 SDS PAGE 겔 분석으로 예상 분자량 종을 알 수 있다. 유동 세포계측 결과 TCR 및 클래스 II 키메라가 동종 수용체를 보유하는 세포에 강한 화합력으로 특이적으로 결합함을 보여준다. 이들 초이량체는 TCR/MHC 상호작용 연구, 림프구 추적, 새 항원 동정에 유용하며 면역 반응의 특이적 조절인자로도 사용가능하다.
    • 2. 发明公开
    • 단백질의 가용성2가 및 다가 헤테로 이량체 유사체
    • 蛋白质的可溶性多元和多重杂交模拟物
    • KR1020000005060A
    • 2000-01-25
    • KR1019980707687
    • 1997-03-28
    • 더 존스 홉킨스 유니버시티
    • 쉬넥조나단피오헤린신
    • C12N15/62C07K19/00C12N5/10
    • C07K14/7051A61K38/00A61K39/00A61K2039/605A61K2039/6056C07K14/70539C07K2319/00C07K2319/30C12N2799/026
    • PURPOSE: Soluble divalent and multivalent heterodimeric analogs of proteins and preparation method thereof are provided which are related to immuno-regulation are useful for studying TCR/MHC interactions, lymphocyte tracking, identifying new antigens. CONSTITUTION: Divalent peptide/MHC complexes or T cell receptors (superdimers) are constructed, to increase the avidity of soluble analogs for their cognates to biologically relevant levels. Using a recombinant DNA strategy, DNA encoding either the MHC class II/peptide or TCR heterodimers are ligated to DNA coding for murine Ig heavy and light chains. These constructs are subsequently expressed in a baculovirus expression system. Enzyme-linked immunosorbant assays (ELISA) specific for the Ig and polymorphic determinants of either the TCR or MHC fraction of the molecule indicates that infected insect cells secreted approximately 1 ug/ml of soluble, conformationally intact chimeric superdimers. SDS-PAGE analysis of purified protein shows that expected molecular weight species. The results of flow cytometry demonstrates that the TCR and class II chimeras bound specifically with high avidity to cells bearing their cognate receptors.
    • 目的:提供蛋白质的可溶性二价和多价异二聚体类似物及其制备方法,其与免疫调节有关,可用于研究TCR / MHC相互作用,淋巴细胞跟踪,鉴定新抗原。 构成:构建了二价肽/ MHC复合物或T细胞受体(superdimers),以增加其可溶性类似物对于相关生物学相关水平的亲合力。 使用重组DNA策略,将编码MHC II类/肽或TCR异源二聚体的DNA连接到编码鼠Ig重链和轻链的DNA。 这些构建体随后在杆状病毒表达系统中表达。 特异于分子的TCR或MHC级分的Ig和多态性决定簇的酶联免疫吸附测定(ELISA)表明感染的昆虫细胞分泌约1μg/ ml的可溶性,构象完整的嵌合超聚体。 纯化蛋白质的SDS-PAGE分析显示预期的分子量物种。 流式细胞术的结果表明,TCR和II类嵌合体具有高亲和力特异性结合携带其同源受体的细胞。