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    • 47. 发明专利
    • METODO PARA IDENTIFICAR GENES NOVEDOSOS.
    • ES2337952T3
    • 2010-04-30
    • ES07799738
    • 2007-07-20
    • PIONEER HI BRED INTDU PONT
    • ABAD ANDRE RDONG HUALO SUSAN BMCCUTCHEN BILLY FSHI XIAOMEI
    • C12Q1/68
    • Un método para identificar genes pesticidas, comprendiendo el método: a) diseñar al menos un par de cebadores oligonucleotídicos para el uso en una primera ronda de PCR que sea específico para un grupo diana de genes pesticidas, comprendiendo el par de cebadores un cebador directo y un cebador inverso, donde cada cebador se dirige a una secuencia distintiva presente en las secuencias de nucleótidos del grupo diana; b) obtener una primera muestra de material de ácido nucleico de un microorganismo de interés; c) mezclar la primera muestra de material de ácido nucleico con el al menos un par de cebadores oligonucleotídicos para el uso en la primera ronda de PCR y una ADN polimerasa termoestable en condiciones que son adecuadas para la amplificación por PCR; d) realizar una primera ronda de PCR y detectar los productos de amplificación por PCR, determinando de este modo si se producen productos de PCR en la primera ronda de PCR; e) obtener una segunda muestra de material de ácido nucleico del microorganismo si se detectan productos de PCR en la primera ronda de PCR; f) diseñar al menos un par de cebadores oligonucleotídicos para el uso en una segunda ronda de PCR que sea específico para el grupo diana de genes pesticidas, comprendiendo el par de cebadores un cebador directo y un cebador inverso, donde cada cebador se dirige a una secuencia distintiva presente en las secuencias de nucleótidos del grupo diana; g) mezclar la segunda muestra de material de ácido nucleico con el al menos un par de cebadores oligonucleotídicos para el uso en la segunda ronda de PCR y una ADN polimerasa termoestable en condiciones que son adecuadas para la amplificación por PCR y realizar una segunda ronda de PCR; h) separar cualquier producto de amplificación por PCR producido en la segunda ronda de PCR usando electroforesis en gel de agarosa y aislar los fragmentos de ácido nucleico para el análisis posterior, donde los fragmentos de ácido nucleico pueden comprender un supuesto fragmento génico pesticida novedoso; i) clonar cada fragmento de ácido nucleico en un vector de clonación; j) transformar las células hospedadoras con los vectores de clonación, donde los vectores de clonación comprenden los fragmentos de ácido nucleico aislados en la etapa (h); k) preparar muestras de ácido nucleico de colonias hospedadoras individuales que comprenden un vector de clonación; l) someter las muestras de ácido nucleico de las colonias hospedadoras individuales a análisis de transferencia puntual usando sondas marcadas que son específicas para todos los genes pesticidas conocidos del grupo diana, donde un fragmento de ácido nucleico aislado en la etapa (h) que no se detecta durante la etapa de análisis de transferencia puntual comprende un supuesto fragmento génico pesticida novedoso; y m) analizar el supuesto fragmento génico pesticida novedoso.
    • 49. 发明专利
    • POLIPEPTIDOS ANTIMICROBIANOS Y SUS USOS.
    • ES2300440T3
    • 2008-06-16
    • ES02726780
    • 2002-04-19
    • PIONEER HI BRED INTDU PONT
    • ALTIER DANIEL JHERRMANN RAFAELLU ALBERT LMCCUTCHEN BILLY FPRESNAIL JAMES KWEAVER JANINE L
    • A01H5/00C07K14/435C12N1/15C12N1/19C12N1/21C12N5/04C12N7/01C12N15/12C12N15/70C12N15/74C12N15/80C12N15/81C12N15/82
    • Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada entre: (a) una secuencia de nucleótidos mostrada en el SEQ ID NO: 100 o 102; (b) una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido mostrado en el SEQ ID NO: 101 o 103; (c) una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencia de al menos 90% con una cualquiera de las secuencias de aminoácidos de (b), donde dicho polipéptido posee actividad defensiva antimicrobiana; (d) una secuencia de nucleótidos que hibrida en condiciones altamente restrictivas con una cualquiera de las secuencias de nucleótidos de (a), donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que posee actividad defensiva antimicrobiana, y donde dichas condiciones altamente restrictivas incluyen hibridación en formamida al 50%, NaCl 1M, SDS al 1% a 37ºC, y un lavado en 0,1 x SSC de 60 a 65ºC; (e) una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de 99% con una secuencia de nucleótidos que codifica una cualquiera de las secuencias de aminoácidos de (b), donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que posee actividad defensiva antimicrobiana; (f) una secuencia de nucleótidos que comprende al menos 25 nucleótidos contiguos de una cualquiera de las secuencias de nucleótidos de (a); donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que posee actividad defensiva antimicrobiana; y (g) una secuencia de nucleótidos que consiste en un complemento de una cualquiera de las secuencias de nucleótidos de (a), (b), (c), (d), (e) o (f).