基本信息:
- 专利标题： 다중 타겟 위치의 단일 핵산서열로의 어셈블리 방법
- 专利标题（英）：Method for assembling multiple target loci to a single nucleic acid sequence
- 专利标题（中）：用于将多个目标位置组装成单个核酸序列的方法
- 申请号：PCT/KR2012/001808 申请日：2012-03-13
- 公开(公告)号：WO2012124965A2 公开(公告)日：2012-09-20
- 发明人： 방두희 , 한효준
- 申请人： 연세대학교 산학협력단 , 방두희 , 한효준
- 申请人地址： 서울특별시 서대문구 연세로 50, 연세대학교 공학원 1층, 120-749 Seoul KR
- 专利权人： 연세대학교 산학협력단,방두희,한효준
- 当前专利权人： 연세대학교 산학협력단,방두희,한효준
- 当前专利权人地址： 서울특별시 서대문구 연세로 50, 연세대학교 공학원 1층, 120-749 Seoul KR
- 代理机构： 양부현
- 优先权： KR10-2011-0023184 20110316
- 主分类号： C12Q1/68
- IPC分类号： C12Q1/68 ; C12N15/11
摘要：
본 발명은 다중 타겟 위치(multiple target loci)를 하나의 어셈블된 핵산서열로의 어셈블리하는 방법 및 이를 이용한 동시 검출방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 두 번의 PCR, 즉 제1차 PCR(polymerase chain reaction) 및 제2차 PCR 반응을 통해 다중 타겟 위치를 하나의 어셈블된 핵산서열로 어셈블리시킨다. 보다 상세하게는, 본 발명에서 이용되는 제1차 증폭용 프라이머쌍(정방향 프라이머 및 역방향 프라이머)은 타겟-특이적 서열(타겟 혼성화 뉴클레오타이드 서열) 및 5'-플랭킹 어셈블리 스페이서 서열(오버래핑 서열)로 이루어져 있다. 또한, 상기 제1차 증폭용 프라이머쌍을 이용하여 증폭된 제1차 증폭결과물을 제2차 증폭용 프라이머 세트를 통해 간편하고 용이하게 하나의 단축된 핵산서열로 어셈블리시켜 다중 타겟 위치를 동시에 검출할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법 및 키트는 시료(바람직하게는, 인간의 혈액)의 DNA 서열 상의 다중 변이성(예컨대, SNPs)을 동시에 검출 및 분석함으로써, 변이 검출을 위한 시퀀싱 비용을 현저하게 감소시킬 수 있을 뿐 아니라 맞춤형 의약의 개념을 실현하기 위한 중요한 접근방법 및 수단을 제공한다.
摘要（中）：
本发明涉及用于将多个目标基因座组装成单个组装的核酸序列的方法，以及使用所述组装方法同时检测多个靶基因座的方法。 本发明的方法包括通过两个聚合酶链反应（PCR）将多个目标基因座组装成单个组装的核酸序列，即初级PCR和二级PCR。 更具体地，用于初次扩增的一对引物（正向引物和反向引物）由靶特异性序列（靶杂交核苷酸序列）和5'-侧翼组装间隔物序列（重叠序列）组成。 此外，通过用于初级扩增的一对引物扩增的初级扩增产物通过用于二次扩增的一组引物以方便和容易的方式组装成单个缩短的核酸序列，从而能够同时检测 多个目标基因座。 因此，本发明的方法和试剂盒可以同时检测和分析样品（优选人血液）的DNA序列中的多种变异性，因此不仅显着降低了检测变异性的测序成本，而且提供了关键方法和手段 实现定制医学的概念。