基本信息:
- 专利标题： 一种单克隆细胞株的构建方法
- 申请号：CN202410404391.7 申请日：2024-04-07
- 公开(公告)号：CN118374454A 公开(公告)日：2024-07-23
- 发明人： 焦鹏 , 皮特侪 桑甘 , 房磊 , 孙贤丽
- 申请人： 上海碧博生物医药科技有限公司 , 上海碧博生物医药工程有限公司
- 申请人地址： 上海市浦东新区中国（上海）自由贸易试验区郭守敬路199号生物与医药创新孵化园207室
- 专利权人： 上海碧博生物医药科技有限公司,上海碧博生物医药工程有限公司
- 当前专利权人： 上海碧博生物医药科技有限公司,上海碧博生物医药工程有限公司
- 当前专利权人地址： 上海市浦东新区中国（上海）自由贸易试验区郭守敬路199号生物与医药创新孵化园207室
- 代理机构： 北京知联天下知识产权代理事务所(普通合伙)
- 代理人： 秦琼
- 主分类号： C12N5/10
- IPC分类号： C12N5/10 ; C12N15/85 ; C12N15/52 ; C07K14/00 ; G01N21/64
摘要：
本发明公开了一种单克隆细胞株的构建方法，包括：用含目的基因和GS基因的外源载体转染宿主细胞，将转染后的宿主细胞于培养基中进行细胞恢复培养，得到待筛选细胞培养液；对待筛选细胞培养液进行荧光标记后用流式细胞仪分选为迷你细胞池，筛选外源蛋白表达量排名前10的迷你细胞池，经分别扩增培养后混合，得到迷你细胞池混合液；对迷你细胞池混合液进行荧光标记后用流式细胞仪分选为单细胞，经单细胞拍照、外源蛋白高表达单细胞筛选、单细胞扩增培养、单细胞分批补料培养与评估，即得。该方法提高了标记的特异性，能够定向筛选高表达迷你细胞池和单细胞细胞株，筛选通量减少三分之二以上，筛选周期缩短至少1个月，表达量提高达72.1%。